| 今天，Biotechniques網(wǎng)站介紹了2014年在該網(wǎng)站發(fā)表的5篇有趣和有用的PCR方法相關(guān)文章。
PCR是現(xiàn)代分子生物學(xué)中的一種基本技術(shù)，所以它的任何創(chuàng)新或改進(jìn)都受到研究人員的極大歡迎。BioTechniques的編輯們一直都非常喜歡PCR方法，我們很高興看到，2014年帶來(lái)了新技術(shù)的強(qiáng)大選擇。在這里，我們介紹了在過去一年中發(fā)表的5篇PCR方法相關(guān)論文，范圍很廣，從基本老式PCR反應(yīng)有效性和特異性的改進(jìn)，到尖端技術(shù)如數(shù)字PCR。
1、 一種強(qiáng)大的耐熱DNA聚合酶鏈置換活性可顯著改善DNA擴(kuò)增結(jié)果
誰(shuí)不喜歡一種多功能的工具呢？當(dāng)你可以用有些奇怪但很方便、孩子喜歡的叉勺時(shí)，為什么還去用勺子和叉子呢？在8月刊的BioTechniques，Ignatov等人描述了DNA聚合酶的叉勺等價(jià)物，一種可用于常規(guī)PCR反應(yīng)以及等溫?cái)U(kuò)增的DNA聚合酶。直到現(xiàn)在，這兩種擴(kuò)增方法還需要非常不同類型的DNA聚合酶：對(duì)于PCR來(lái)說(shuō)，一種耐熱DNA聚合酶（如Taq酶），可以經(jīng)受住每一個(gè)PCR循環(huán)中的熱變性步驟；對(duì)于等溫?cái)U(kuò)增來(lái)說(shuō)，一種DNA聚合酶如Bst，具有很強(qiáng)的鏈置換活性，使DNA鏈分開而代替熱變性。Ignatov和同事們證明，一種新型Taq DNA聚合酶突變體，具有很強(qiáng)的鏈置換活性，稱為SD DNA聚合酶，不僅可用于PCR和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法（LAMP）以及近描述的聚合酶鏈置換反應(yīng)方法，而且能夠改善靈敏度和效率，即使在困難的情況下，例如長(zhǎng)片段PCR或GC富集模板的擴(kuò)增。這種多用途的新型DNA聚合酶應(yīng)該是對(duì)DNA擴(kuò)增酶工具箱的一種受歡迎的補(bǔ)充。
2、 牛凝血酶可提高聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的效率和特異性
當(dāng)PCR不能正常工作，或產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物和引物二聚體而不是預(yù)期的擴(kuò)增子時(shí)，這是非常令人沮喪的。多年來(lái)，研究人員已經(jīng)在PCR反應(yīng)中添加了許多化合物，以提高DNA擴(kuò)增的特異性和效率。這些添加物范圍很廣，從小的有機(jī)分子（例如甘油和甜菜堿）到非離子型洗滌劑（如Triton X-100和Tween，到蛋白質(zhì)如BSA）。不幸的是，每一種添加物只在一組特定的條件下改善PCR擴(kuò)增結(jié)果。真正理想的狀態(tài)是，一種PCR增強(qiáng)劑在盡可能多的不同情況下都可以起作用，Xi |
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