蛋白Marker可分為：一、未預(yù)染的Marker即寬分子
量蛋白標準、高分子量蛋白標準以及低分子量蛋白標準;二、預(yù)染的Marker即單色預(yù)染和多色預(yù)染。
在western blot
過程中，分子量Marker就像個螺絲釘一樣沒雖然是個小細節(jié)，然而就是這樣一個小細節(jié)對實驗結(jié)果有著不可忽視的作用。這個 Western
Blot參照家族的一員的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應(yīng)的分子量大小，只有標準量精確無誤了，實驗結(jié)果才有說服力，除此之外，蛋白標準還有表示轉(zhuǎn)移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用，所以選擇正確的蛋白Marker也是western
blot實驗成功的必要條件之一。
總體來說，蛋白分子
量標準可以分成未染蛋白分子量標準、預(yù)染蛋白分子量標準二個級別。以下是關(guān)于蛋白分子量標準的小敘：
一. 未染色(pre mixed)蛋白分子 量標準
未染色的蛋白分子
量標準是簡單，也是準確的一種。由于沒有附帶染料分子或者是標記分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，是精確判斷蛋白大小必須的。現(xiàn)在的Marker多數(shù)都選用預(yù)混和的Marker，方便不同大小的蛋白比較。預(yù)混的Marker通常有幾條帶加倍濃度作為指示，因為混合的條帶越多，越不好記，誰知道哪條是那條!數(shù)到眼都花了。所以當看到特別濃的那幾條標志帶就記得是哪里了。不過要記得，小帶通常都不那么容易看清楚的。在選擇上來說，當然是選擇其中至少有一條條帶和自己的目的蛋白大小相近的好，越近越好。如果你的蛋白不幸在兩條跨度較大Marker條帶之間，選別的Marker吧。預(yù)混的Marker使用上不如預(yù)染Marker(pre-stained)好用，因為電泳過程中完全看不到，要和目標蛋白一起等到后染色才“開蠱”，無法對實驗起預(yù)示參照作用。完全屬于“后知后覺”型的，當然還是比“不知不覺”不做對照的要好。
① 寬分子量蛋白標準
如果從實驗室總體考慮的，就選范圍盡量寬，條帶分布比較均勻的，這樣你的蛋白無論在哪個區(qū)間都容易判斷，避免正好落在一段空白區(qū)的危險。不過條帶越多，每次上樣量也就越費。拿到Marker后，如果買的是大包裝，就應(yīng)該考慮分裝。多次反復(fù)凍融對于蛋白的危險，不用多說吧。另外要記得，寬譜的 |
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